| 专利名称 | 分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法 | 申请号 | CN201310317850.X | 专利类型 | 发明专利 | 公开（公告）号 | CN103525712A | 公开（授权）日 | 2014.01.22 | 申请（专利权）人 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 发明（设计）人 | 吴东海;杨松;刘月红;李侍武;徐爱民;李鹏;刘彭涛 | 主分类号 | C12N1/19(2006.01)I | IPC主分类号 | C12N1/19(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N | 专利有效期 | 分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法 至分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法 | 法律状态 | 实质审查的生效 | 说明书摘要 | 本发明公开了一种分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法，所述方法步骤为：正向引物5’端引入XhoI，对应Kex2识别区域P1’位点分别引入20种氨基酸密码子，反向引物5’端引入NotI，得20对引物；以目标基因CDS序列cDNA或DNA为模板扩增，TA克隆得载体群P1’-CDS-pMD20-T；构建酵母真核表达载体群P1’-CDS-pPICZαA；转化载体群至酵母，筛选阳性转化子，并接到YPD平板，得相同拷贝数的转化子群甲醇诱导，分析蛋白产量，即得表达水平最高的转化子。本发明制备方法通过对Kex2的P1’氨基酸残基的优选以提高Kex2蛋白酶识别底物的活性，从而提高酵母分泌表达重组蛋白的产量。 |
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