| 专利名称 | 一种基于microRNA结构的肝细胞选择性多靶点干扰质粒载体的构建方法及其功能验证 | 申请号 | CN201110363118.7 | 专利类型 | 发明专利 | 公开（公告）号 | CN102433352A | 公开（授权）日 | 2012.05.02 | 申请（专利权）人 | 中国科学技术大学 | 发明（设计）人 | 田志刚;耿建林;孙汭;魏海明 | 主分类号 | C12N15/66(2006.01)I | IPC主分类号 | C12N15/66(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I | 专利有效期 | 一种基于microRNA结构的肝细胞选择性多靶点干扰质粒载体的构建方法及其功能验证 至一种基于microRNA结构的肝细胞选择性多靶点干扰质粒载体的构建方法及其功能验证 | 法律状态 | 实质审查的生效 | 说明书摘要 | 本发明公开一种基于microRNA结构的能实现肝细胞选择性多靶点干扰的质粒载体pLIVE-(shLuc155mir-shLuc155mir-shEGFP131mir-shEGFP425mir)的构建方法及其功能验证。所述质粒载体由具有肝细胞选择性的甲胎蛋白增强子/白蛋白启动子(AFP?enhancer/albumin?promoter)、多克隆位点区(Multiple?Cloning?Sites，MCS)、两个内含子区(intron)、多个靶基因的基于microRNA结构的短发卡RNA转录单位(microRNA30-based?shRNA，shRNAmir)和质粒序列组成。在第二个内含子(intron?2)区域内，通过同尾酶结构的设计，串联多个相同或者不同的针对荧光素酶基因(Luciferase)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的shRNAmir转录单位，同时选择性的高效抑制肝细胞内Luciferase和EGFP的表达。该载体及其构建方法可以应用于肝细胞基因的功能研究和肝脏疾病基因治疗药物的研发，同时对于其他细胞/组织特异性干扰载体的构建具有重要的借鉴和参考价值。 |
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