| 专利名称 | 抗菌肽buforinⅡ和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用 | 申请号 | CN200910273232.3 | 专利类型 | 发明专利 | 公开（公告）号 | CN101717737A | 公开（授权）日 | 2010.06.02 | 申请（专利权）人 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 发明（设计）人 | 唐志如;冯泽猛;印遇龙;张友明 | 主分类号 | C12N1/19(2006.01)I | IPC主分类号 | C12N1/19(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;A23K1/16(2006.01)I;A23K1/18(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N | 专利有效期 | 抗菌肽buforinⅡ和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用 至抗菌肽buforinⅡ和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用 | 法律状态 | 专利申请权、专利权的转移 | 说明书摘要 | 本发明公开了一种抗菌肽buforin?II和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用，毕赤酵母菌(Pichia?pastoris?FZM2009，CCTCC?NO：M209259)。其步骤是：A、表达盒PAOX1-αFactor-IFNα-6×His-bufforin?II-Zeocinr的构建；B、表达工程菌Pichia?pastoris?FZM2009的构建，经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定得到工程菌。C、融合蛋白的制备步骤是：1)在含有100μg/ml?Zeocin的YPD平板上复苏；2)挑单克隆接种于含有YPD培养基中，振摇培养；3)将一体积培养物接种于十体积发酵培养基培养；4)离心，获取上清；5)加一倍体积上样缓冲液上清中，电泳检测；6)上清液过分子筛凝胶柱，收集组分；7)冷冻干燥收集的组分，得到融合蛋白；8)用肠激酶酶切融合蛋白获得buforin?II和IFNα。融合表达融合蛋白buforin?II和INF-α应用猪饲料。方法易行、操作简便、表达量高、成本低廉、生物学活性强。 |
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