| 专利名称 | 含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用 | 申请号 | CN200910062093.X | 专利类型 | 发明专利 | 公开（公告）号 | CN101586119 | 公开（授权）日 | 2009.11.25 | 申请（专利权）人 | 中国科学院水生生物研究所 | 发明（设计）人 | 冯立芳;缪炜 | 主分类号 | C12N15/85(2006.01)I | IPC主分类号 | C12N15/85(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I;G01N21/76(2006.01)I;C12R1/90(2006.01)N | 专利有效期 | 含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用 至含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用 | 法律状态 | 实质审查的生效 | 说明书摘要 | 本发明公开了一种含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法 和应用。利用质粒rDNA-GFP，通过酶切和PCR酶切位点突变等方法，构建质 粒T-GFP；利用嗜热四膜虫基因组DNA，通过PCR扩增和克隆等方法，构建质 粒T-HSP702；利用质粒T-GFP、T-HSP702和pD5H8，通过酶切和连接最终构建 得到质粒HSP702-GFP-pD5H8。该载体含有HSP702启动子，能实现外源基因高 效表达；该载体上含有可替换的外源基因gfp，通过替换不同的外源基因，以实 现四膜虫成为一个外源基因表达系统；在巴龙霉素药物筛选作用下，该载体替换 掉四膜虫体内原有的绝大部分rDNA，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，以实 现目标基因的遗传转化。本发明方法易行，操作方便，该载体在转染进四膜虫中 可用于环境中三丁基锡的检测。 |
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